超聲波DNA打斷儀器的作用

? 超聲波DNA打斷儀器包括:在二價陽離子、隨機DNA雙鏈結合蛋白、非離子表層活性劑和單價鹽存在下，DNA分子被打斷。可以有效提高測序文庫的構建效率。DNA分子的雙螺旋結構是兩個脫氧核苷酸長鏈通過內部氫鍵形成的堿基對穩(wěn)定地平行連接，堿基對之間的縱向相互作用進一步提高了DNA分子的穩(wěn)定性，因此DNA分子的雙螺旋結構是一種相對穩(wěn)定的結構。

　　隨著高通量測序(NGS)技術的發(fā)展和成熟，其在科研、診斷和體檢中的應用范圍不斷擴大。除了市場的擴大，測序技術本身的發(fā)展也有所放緩，制約技術擴展和應用的瓶頸逐漸顯現(xiàn)。如今，NGS樣品制備的瓶頸效應越來越明顯，新的試劑和儀器不斷涌現(xiàn)，以縮短時間，提高通量。同時，不斷開發(fā)新的方法來處理較少的樣品起始量等。

　　目前常用的脫氧核糖核酸(簡稱DNA)分子片段化方法有四種，即DNA限制性酶切法、流體力學剪切法、超聲波破碎法和噴霧霧化法，各有優(yōu)缺點。長鏈DNA(通常稱為生物染色體DNA)片段化的主要原因是短的DNA 片段有利于DNA分子的快速雜交和高靈敏度的靶標檢測，而片段化是NGS文庫構建過程當中不可避免的過程。

　　超聲波DNA打斷儀器是一種基于流體力學剪切法和超聲波壓裂法的破碎方法，是DNA分子破碎的推薦方法。另外，由于DNA分子本身的特異性，比如甲基化修飾的程度，會改善分子本身的特性。使用力學方法，該區(qū)域將具有不同于其他區(qū)域的斷裂比(概率)，從而在一定程度上引入了力學中斷的偏好。采用低成本非限制性內切酶法，擺脫了中斷儀器的限制，建立了適用于一般分子生物學實驗室和高通量NGS文庫建設實驗室的DNA中斷方法。